Биохимия зерна, биохимия хлебопечения- биохимия бродильных производств. Владимирова Е.Г - 12 стр.

     Опыт 2. Определение осахаривающей способности β-амилазы

     В мерную колбу на 100 см3 вносят 50 см3 2%-ного раствора растворимого
крахмала и 5 см3 фосфатного буфера с рН-5,6. содержимое пробирки
прогревают в водяной бане при 400 С в течение 15 минут. Затем в колбу вносят
5 см3 ферментного препарата β-амилазы. Раствор в колбе перемешивают и
снова ставят в водяную баню при той же температуре на         30 минут. По
истечении этого времени ферментативный процесс гидролиза крахмала
останавливают путем добавления 10 см3 раствора сернокислой меди ω(CuSO4)
= 6 %. После этого раствор охлаждают до комнатной температуры и доводят
водой до метки. Количественное определение сахаров производят по методу
Бертрана. Пересчет сахаров ведут на мальтозу, как на основной продукт
распада крахмала при действии β-амилазы. Мерой активности β-амилазы
служит количество разложившегося крахмала, выраженное в процентах от его
первоначального веса.

     Опыт 3. Влияние температуры на активность β-амилазы

     Температура оказывает большое влияние на скорость ферментативной
реакции. При низких температурах (0-40С) ферментативные реакции протекают
с очень малой скоростью. Температура выше 600С вызывает инактивацию
большинства ферментов. Температурный оптимум многих ферментов лежит в
пределах 40-500С.
     Опыты ставят при температурах 40С (холодильник), 200 С (комнатная),
400С и 600С ( водяная баня). Для получения хороших результатов необходимо
строго выдерживать условия проведения анализа и в течение всего опыта
поддерживать заданную температуру.
      В мерную колбу на 100 см3 вносят 50 см3 2 %-ного раствора крахмала и 5
см3 фосфатного буфера с рН 5,6. Содержимое колбы доводят до заданной
температуры (нагревают или охлаждают), после чего вносят 5 см3 ферментного
препарата, предварительно термостатированного при той же температуре и
замечают время. Гидролиз продолжается 30 минут, в течение которых строго
следят за поддержанием постоянной температуры. Через 30 минут в колбу
вносят 10 см3 раствора сернокислой меди ω(CuSO4) = 6 % для прекращения
действия фермента, содержимое колбы охлаждают и доводят водой до метки.
Количество образовавшейся мальтозы определяют методом Бертрана.
Полученные результаты сводят в таблицу и строят график, характеризующий
влияние температуры на активность β-амилазы.

      Опыт 3. Влияние рН на осахаривающую способность солодовых амилаз

     Каждый фермент проявляет свою активность в определенной зоне рН.
Для определения влияния рН среды на осахаривающую способность солодовых
амилаз проводится коллективная работа. Опыты ставят при постоянной
температуре, но разных значениях рН (2,6; 4,4; 5,0; 5,8;7,0;8,0 и др.).
12