Методы исследования мяса и мясных продуктов. Забалуева Ю.Ю - 19 стр.

UptoLike

ВУЗ: 

ВСГУТУ | Улан-Удэ

Составители: 

Рубрика: 

37
ткани пользуются коэффициентом 5,62, принимая во
внимание, что массовая доля азота в коллагене 17,8%. При
использовании метода небелковый азот продуктов не
учитывается.
Подготовка проб осуществляется следующим образом.
Исследуемые образцы тщательно измельчают (ножом или на
мясорубке). В колбу Кьельдаля вместимостью 50 см
3
вносят
0,2 см
3
сыворотки крови или взвешивают на аналитических
весах 0,15-0,2 г ткани (мышц, сухожилий, почек, печени и др.)
при помощи кусочка стекла навеску опускают на дно колбы.
Добавляют 1-2 см
3
концентрированной серной кислоты, 1г
смеси сульфата меди и сульфата калия в качестве
катализатора. Содержимое колбы нагревают до получения
коричневой окраски, колбу снимают с огня, охлаждают при
комнатной температуре, добавляют 2-3 см
3
раствора
пероксида водорода с массовой долей 30% и продолжают
нагревать до получения бесцветного минерализата.
Последний используют для количественного определения
белка.
Минерализат охлаждают, количественно переносят в
мерную колбу вместимостью 250 см
3
, объем доводят до метки
дистиллированной водой, содержимое перемешивают.
В мерную колбу вместимостью 100 см
3
вносят 5 см
3
полученного раствора минерализата, повторно доводят объем
до метки дистиллированной водой. Для проведения цветной
реакции 1см
3
вторично разбавленного минерализата вносят в
пробирку, добавляют последовательно 5 см
3
реактива 1 и 5см
3
реактива 2, содержимое пробирки перемешивают.
Одновременно готовят контрольный раствор, используя при
этом контрольный минерализат (проба с использованием
дистиллированной воды). Через 30 мин определяют
оптическую плотность растворов на фотоэлектроколориметре
с красным светофильтром. Измерение проводят в сравнении с
контрольным раствором.
38
Для построения калибровочного графика используют
стандартный раствор сульфата аммония, для приготовления
которого берут 0,236г сульфата аммония. Предварительно
высушенного до постоянной массы при температуре 60
0
С,
вносят в мерную колбу вместимостью 500 см
3
, растворяют в
дистиллированной воде и доводят объем до метки. Этот
раствор является стандартным и содержит 0,1 мг азота в 1 см
3
.
В мерные колбы вместимостью по 100 см
3
вносят
следующие объемы стандартного раствора (см
3
) 1,0; 1,5; 2,0;
2,5; 3,0; 3,5; 4,0; 4,5; 5,0. После доведения объемов растворов
в колбах дистиллированной водой до метки получают серию
рабочих растворов концентрацией 1,0; 1,5; 2,0; 2,5; 3,0; 3,5;
4,0; 4,5; 5,0 мкг азота в 1 см
3
.
Для проведения цветной реакции в пробирки
помещают по 1 см
3
рабочего раствора, добавляют 5 см
3
реактива 1 и 5 см
3
реактива 2, перемешивают и через 30 мин
измеряют величину оптической плотности на
спектрофотометре при длине волны 625 нм или на
фотоэлектроколориметре с красным светофильтром с
толщиной поглощающего свет слоя 1 см по отношению к
контрольному опыту. Опыт повторяют 3 раза. Для каждого
определения готовят стандартный раствор.
По полученным средним данным из трех стандартных
растворов строят калибровочный график, откладывая на оси
абсцисс концентрацию азота (С, мкг/см
3
), а на оси ординат -
соответствующую ей оптическую плотность (Д) при длине
волны 750 нм. Калибровочный график должен проходить
через начало координат.
По полученной величине оптической плотности с
помощью калибровочного графика определяют
концентрацию азота.

Страницы