Методы исследования мяса и мясных продуктов. Забалуева Ю.Ю - 22 стр.

UptoLike

ВУЗ: 

ВСГУТУ | Улан-Удэ

Составители: 

Рубрика: 

43
значения оптической плотности при 750 нм. По графику
находят концентрацию тирозина, которая соответствует
найденной оптической плотности.
Таблица 2
Растворы тирозина с рекомендуемой массовой
концентрацией
Содержание
тирозина, мкг
Объем раствора
тирозина, мл
Объем
раствора соляной
кислоты молярной
концентрацией 0,2
моль/л, мл
Значение
экстинкции
10
20
30
40
50
60
70
80
90
0,1
0,2
0,3
0,4
0,5
0,6
0,7
0,8
0,9
0,9
0,8
0,7
0,6
0,5
0,4
0,3
0,2
0,1
0,113
0,208
0,316
0,401
0,511
0,614
0,706
0,817
0,900
• Метод Лоури в модификации Ластыть
В мерную колбу вместимостью 100 мл вносят 2-5 мл
щелочного экстракта белков образца, приготовленного в
соответствии с прописью подготовки проб, прибавляют 15 мл
раствора тартрата калия – натрия молярной концентрацией 1
моль/л и доводят объем дистиллированной водой до метки. В
зависимости от массового содержания азота для
фотометрического определения используют 0,2 мл
приготовленного раствора. Объем доводят до 10 мл с
помощью реактива А. по истечении 30 мин измеряют
оптическую плотность раствора на спектрофотометре при
λ=750 нм. Для определения содержания азота строят
калибровочный график.
44
¾ Определение массовой доли белка
биуретовым методом (экспресс-метод)
Биуретовый метод основан на образовании сине-
фиолетовой окраски при воздействии на белки сульфата меди
в присутствии щелочи. Природа белка почти не влияет на
формирование окрашенного биуретового комплекса, который
возникает за счет присоединения ионов меди к пептидным
связям белка. Оптическую плотность окрашенных растворов
измеряют при длине волны 540 нм. Преимущества метода —
возможность применения стандартного белка для построения
калибровочною графика, воспроизводимость и точность.
Щелочной экстракт белков объемом 2 мл смешивают с
15 мл биуретового реактива. После 30 мин инкубирования
смеси при 37
0
С, проводят спектрофотометрирование при
λ=550нм.
Контрольный опыт готовят аналогично, используя
вместо образца 1 мл дистиллированной воды.
Построение калибровочного графика. Для построения
графика готовят ряд последовательных разведений
стандартного раствора белка, в качестве которого используют
кристаллический сывороточный альбумин: 0,01г белка
растворяют в 100 мл дистиллированной воды, отбирают 1 мл
и доводят объем до 10мл и т.д.
С пробами из каждого разведения белка проводят
биуретовую реакцию в условиях, соответствующих
описанию метода, и измеряют оптическую плотность
окрашенных растворов. Затем строят график D=f(с).
¾ Определение массовой доли белка методами,
основанными на связывании красителей (экспресс-метод)
Методы определения массовой доли белка по
связыванию красителей основаны на способности белков при
рН ниже изоэлектрической точки (рН 2—4) присоединять
кислые красители с образованием нерастворимых

Страницы